1. 实验耗材和试剂
实验药品:水合氯醛,生理盐水。
实验器材:碘伏,碘伏棉,酒精棉,手术剪,细弯剪,镊子,1mL注射器,5mL注射器,缝合针,小型动脉夹,4-0号缝合线,3-0号缝合线,线栓,无菌纱布,去毛器,大鼠固定板。
2:实验前准备
(1)进行手术前,大鼠禁食不禁水16h。
(2)所有实验用具均进行消毒灭菌处理,使用前放置在75%乙醇中。
(3)距离线栓18mm处进行标记。
3:动物麻醉
手术前腹腔注射水合氯醛对大鼠进行麻醉,给药体积1mL/100g,水合氯醛浓度为3%,溶于生理盐水中,现配现用。
4:造模方法
(1)对麻醉后的大鼠采用仰卧位固定在手术板上,对颈部进行备皮,使用酒精棉和碘伏棉对颈部进行消毒。
(2)使用手术剪剪开左侧颈部皮肤、皮下结缔组织,使用棉签分离肌肉组织,找到颈总动脉。
(3)分离出干净的颈总动脉,向上分离肌肉和结缔组织直至能明显看见Y字型结构,其中靠近气管的为颈外动脉,另一根为颈内动脉。
(4)先在Y字型分叉处使用4-0号线结扎颈外动脉,再使用4-0号线距离分叉口4mm左右处结扎颈总动脉。使用小型动脉夹夹住颈内动脉。
(5)在颈总动脉和交叉口之间使用细弯剪在颈总动脉剪开一个小口或用注射器扎入血管,在小口和交叉口之间提前准备一根4-0缝合线,打结但不拉紧。
(6)将线栓从切口处插入,当线栓进入到颈内动脉后,拉紧准备好的4-0缝合线防止出血,松开动脉夹,将线栓轻轻送入到大脑前动脉,此时线栓大概进入18mm(18mm的标志刚好在交叉口)。再将拉紧的4-0缝合线打上死结,防止线栓脱出。
(7)缝合皮肤伤口,放回饲养笼。
(8)2小时后使用麻醉机麻醉大鼠,在保持麻醉状态下拔出线栓至感受到明显阻力,线栓硅胶头由MCA处退至线栓插入口。
(9)缺血再灌注24h后进行动物行为学检测,若出现明显行为学特征可视为造模成功,可开展后续实验。
1:行为学检测采用改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,mNSS)
图1:大鼠右前肢屈曲,头部转动偏离中轴
图2:大鼠向偏瘫侧转圈
2:TTC染色
常见分析方式:
脑梗死体积比=(缺血对侧半脑体积-缺血侧非梗死体积)/缺血对侧半脑体积(各文献计算公式不同,此计算方式去除脑梗导致水肿对体积造成的影响,可见于多篇文献中使用)
3:常见脑梗检测特殊染色
4:常见脑梗免疫荧光检测