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实验资料
「病理实验有话说」-DSS造模——从原理到应用,助力IBD药物
无菌水配置对应浓度DSS溶液,0.22μm滤嘴过滤。常使用30-50kDa的DSS,分子量过大DSS难以穿过肠粘膜,分子量过小诱导的炎症较轻。
适应性喂养后更换DSS溶液自由饮用,本次实验使用2%DSS溶液和3%DSS溶液,分子量40kDa。
1:疾病活动指数(DAI)
每日定时监测实验动物体质量变化、粪便稠度及便血程度。体质量变化率=100×(Wn-W0)/W0,其中Wn为第n天体质量(g),W0为基线体质量(g)。疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分参照表1所示标准化评分系统进行评定,计算公式为:DAI=(体质量变化得分+粪便稠度得分+便血程度得分)/3
体重变化记录
2:结肠长度
适应性喂养后,各组小鼠体重无显著性差异。在实验周期9天内自第三天起2%DSS组体重开始显著下降,最终体重变化率11.1%;3%DSS组较2%DSS组下降幅度更为明显,最终体重变化率14.5%。除体重变化外2%DSS组和3%DSS组均出现粪便松软、隐血情况,3%DSS组结肠长度4.9cm、2%DSS溶液组结肠长度5.4cm相较于空白对照组结肠长度6.5cm均有明显缩短,说明DSS溶液会引起肠道结构损伤,且损伤程度和DSS溶液浓度有关。
3:病理检测
经病理学检测,样本正常组HE未见明显病理损伤。与正常组HE相比,样本2% DSS组HE病理损伤程度较重,见少量黏膜上皮细胞坏死、固有层肠腺轻微萎缩伴少量炎细胞浸润、黏膜下层结缔组织水肿明显;样本3% DSS组HE病理损伤程度急剧加重,见黏膜上皮大量细胞坏死、固有层纤维化严重伴炎细胞浸润、肠腺消失、黏膜肌层平滑肌细胞空泡变性、黏膜下层水肿明显伴大量炎细胞浸润。正常组AB-PAS染色可见杯状细胞丰富、分布均匀。含有酸性、混合型粘蛋白呈现出蓝色、蓝紫色阳性表达,2%DSS组与正常组对比杯状细胞显著减少,部份杯状细胞颜色浅染说明黏蛋白储备耗竭,而3%DSS组杯状细胞极度减少,部分区域甚至完全消失。
免疫荧光实验可见2%DSS组和3%DSS组的ZO-1 / Occludin表达显著降低,且3%DSS组降低更多,在DSS的攻击下ZO-1 / Occludin出现明显的表达下调,ZO-1和Occludin不再连续地分布在细胞边界,而是变得断续、模糊、呈点状或锯齿状,而这说明了紧密连接结构的解体和肠道屏障功能的严重受损。
4:蛋白检测
TNF-α与IL-6均为促炎因子,在DSS模型中,3%浓度的DSS组中TNF-α和IL-6的相对表达量明显高于2%浓度的DSS组,说明在与2%浓度相比,3%浓度的DSS会诱导更严重的结肠炎。

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