CCl4本身无直接肝毒性，进入小鼠体内后会优先富集于肝脏，经肝细胞内质网中的细胞色素P450 2E1（CYP2E1）代谢活化，生成高活性的三氯甲基自由基（·CCl4）和三氯甲基过氧自由基。
这些自由基会迅速攻击肝细胞的细胞膜与细胞器膜，引发剧烈的脂质过氧化反应，破坏膜结构完整性，导致肝细胞通透性增加、钙超载，最终引发肝细胞水肿、脂肪变性、坏死与凋亡；同时会激活炎症通路，诱导大量炎症细胞浸润，进一步加重肝损伤。
最终表现为血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）急剧升高，肝脏出现典型的急性肝损伤病理改变，完美模拟临床化学性急性肝炎的病理生理过程。
1.实验动物准备
品系选择：优先选择对CCl4敏感的品系，常用C57BL/6小鼠。
周龄与体重：推荐6-8周龄、体重18-22g的小鼠。周龄过小肝脏代谢酶未发育完全，周龄过大敏感性下降，个体差异显著增大。
性别选择：优先选择雄性小鼠。雄性小鼠肝脏CYP2E1活性显著高于雌性，对CCl4更敏感，造模效果更稳定；雌性小鼠因雌激素可抑制CYP2E1活性，敏感性低，非特殊需求不推荐使用。
适应性饲养：小鼠购入后，需在SPF级动物房适应性饲养3-7天，环境控制为温度22±2℃、湿度50±10%、12h明暗交替，自由进食饮水，避免频繁惊扰，减少应激对实验的干扰。
给药前处理：给药前禁食12h，不禁水。禁食可减少食物对肝脏代谢酶活性的影响，大幅降低组内个体差异，提高造模稳定性。
2.试剂与器材准备
核心试剂：分析纯四氯化碳（CCl4）、橄榄油（优先选择，刺激性更小、吸收更稳定，也可选用玉米油）；严禁用无水乙醇、DMSO、生理盐水为溶剂，CCl4不溶于水，有机溶剂会加重肝损伤，严重干扰实验结果。
器材准备：1mL注射器、精度0.01g电子天平、通风橱、丁腈手套、护目镜、医用口罩。
试剂配制（核心重点，严禁出错）：
全程在通风橱内操作，佩戴全套防护装备，避免吸入和皮肤接触；采用体积比（V/V）配制，急性造模常用浓度为20%，即CCl4:橄榄油=1:4；
给药剂量参考（单次给药，腹腔注射）：
小鼠推荐20%的CCl4按10ml/kg给药。
3.核心给药操作（首选：腹腔注射）
腹腔注射因操作简单、吸收快、稳定性高，是CCl4急性肝损伤造模的首选给药方式，操作要点如下：
1、小鼠精准称重，根据体重计算给药体积，提前标记小鼠与对应注射器，避免给药错误；
2、小鼠固定：左手抓取小鼠，固定头部与背部皮肤，使腹部充分暴露，保持头部朝下体位，让腹腔脏器自然下沉，避免进针时刺伤脏器；
3、进针操作：右手持注射器，在小鼠下腹左/右两侧（避开腹中线）45°角进针，进针深度约3-5mm，有落空感后，轻轻回抽针芯，确认无血、无肠液、无尿液后，缓慢匀速推注药液；
4、推药完成后，缓慢拔出针头，用棉签轻压进针点2-3s，避免药液漏出，放回饲养笼。
给药后，推荐在24h取材检测，从以下2个维度验证造模是否成功。
1.血清生化检测（核心金标准）
血清ALT、AST是反映肝细胞损伤最核心的指标，肝细胞坏死后，胞浆内的ALT、AST会大量释放进入血液，导致血清水平急剧升高。
正常参考值：健康小鼠血清ALT、AST多在10-40U/L；
造模成功标准：造模组小鼠血清ALT、AST较正常对照组升高10倍以上，通常可达数百甚至上千U/L，组内变异系数＜30%；
2.肝脏大体与组织病理学检测
大体观察
正常小鼠肝脏：颜色呈均匀红褐色，质地柔软有弹性，边缘锐利，表面光滑；
造模成功肝脏：肝脏明显肿大、重量增加，颜色呈土黄色或黄褐色，质地变脆，边缘圆钝，表面可见弥漫性点状坏死或出血点，切面油腻。
组织病理学检测（HE染色，核心金标准）：
正常肝组织：肝小叶结构完整，肝细胞排列整齐，无水肿、变性、坏死，无炎症细胞浸润；
造模成功肝组织：肝小叶结构紊乱，肝细胞出现弥漫性水肿、气球样变、脂肪变性，中央静脉周围可见大量点状、灶状坏死，坏死区及汇管区有大量炎症细胞浸润。
空白组--无明显病变
模型组--肝细胞脂肪变（红色箭头）、肝细胞坏死（橙色箭头）、肝细胞水肿（黄色箭头）
P65 qPCR检测：模型组P65 mRNA表达量显著高于对照组。
1.溶剂选错：严禁用无水乙醇、DMSO、生理盐水作为溶剂，必须用橄榄油/玉米油稀释，否则会严重干扰实验结果。
2.剂量/浓度配错：混淆体积比与质量比、原液剂量与溶液剂量，导致造模失败；务必先做预实验确定最优剂量。
3.性别选错：使用雌性小鼠造模，因CYP2E1活性低，造模效果极差，非特殊需求必须用雄性小鼠。
4.未禁食处理：给药前未禁食，食物影响肝脏代谢酶活性，导致组内个体差异极大，造模不稳定。
5.试剂配制不当：提前配制溶液导致CCll4大量挥发，浓度下降；必须现配现用，全程通风橱密闭操作。
6.操作不规范：腹腔注射进针过深刺伤肝脏/肠道，或回抽有异常仍推药，导致小鼠意外死亡，干扰实验结果。
7.取材时间错误：给药后不足12h取材，损伤峰值未到；超过72h取材，肝细胞已启动修复，指标下降，无法反映急性损伤峰值。
8.环境应激干扰：造模期间频繁惊扰小鼠、更换饲养笼，导致应激性肝损伤，叠加CCl4损伤，干扰实验结果。
9.防护不到位：未在通风橱操作，未佩戴防护装备，CCl4吸入或皮肤接触危害健康；废液需专门收集，合规处理。
10.样本处理不当：取材后血液未及时分离血清、肝组织未及时固定或冻存，导致指标降解，检测结果失真。
1、保肝药物/功能性食品的筛选与药效评价：包括化学药、中药提取物、天然产物、益生菌等的保肝活性验证，是目前最常用的应用方向。
2、急性肝损伤的发病机制研究：探索氧化应激、炎症反应、细胞凋亡、自噬等在急性肝损伤中的作用机制。
3、肝再生与修复相关研究：观察急性损伤后肝脏的修复过程，筛选促进肝再生的靶点与药物。
4、肝毒性评价：评估药物、化学品的潜在肝毒性。
